A multi-colour confocal microscopy method for identifying and enumerating macrophage subtypes and adherent cells in the stromal vascular fraction of human adipose.

หลักฐานจากการศึกษาในห้องปฏิบัติการและสัตว์ทดลอง เป็นรากฐานที่ช่วยให้เข้าใจกลไกและศักยภาพก่อนการศึกษาในมนุษย์ต่อไป

• ระดับ A · หลักฐานทางคลินิกค่อนข้างแข็งแรง
• ระดับ B · หลักฐานทางคลินิกที่กำลังเติบโตและมีสัญญาณเชิงบวก
• ระดับ C · งานวิจัยในมนุษย์ระยะต้นที่กำลังสำรวจประโยชน์
• ระดับ D · รากฐานทางวิทยาศาสตร์จากห้องปฏิบัติการและสัตว์ทดลอง
• กำลังศึกษาเพิ่มเติม · หัวข้อใหม่ที่นักวิจัยกำลังสำรวจอย่างต่อเนื่อง

บทคัดย่อ (ต้นฉบับภาษาอังกฤษ)

This study examines leukocytes present in lymphoedema (LE) adipose tissue (AT) by multi-colour confocal microscopy. LE AT, collected by liposuction surgery, was digested with collagenase to separate adipocytes from other tissue cells, comprising blood and lymphatic endothelial cells, fibroblasts, and all vessel- and tissue-resident leukocytes - the stromal vascular fraction (SVF). SVF cells were activated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin, adding Brefeldin-A to prevent cytokine secretion during the final 4 hours. Cells were incubated with CD11b-FITC and CD40-APC (M1 MØ)' or CD206-APC (M2 MØ) specific antibodies, fixed, permeabilised, then incubated with either (1) anti-TNF-PE, (2) anti- IL-1β-PE, (3) anti-IL-6-PE, (4) anti-IL-4-PE, (5) anti-TGFβ-PE or (6) isotype-IgG-PE (control), and stained with Hoechst 33342, preserved in permanent mounting media and examined by confocal microscopy. The FITC, PE and APC fluorescence channels were set to achieve minimal cross-channel emission using single-colour controls and voltages set for optimal detection by thresholding on isotype-IgG stained activated cells. Finally, transmission and z-stack images were captured. Cells were analysed as regions of interest (ROI) based on Hoechst-33342 then enumerated as FITC + , FITC + APC + or FITC + APC + PE + using an ImageJ script and exported into Excel. This permitted the exa

ระดับหลักฐาน

หลักฐานจากการศึกษาในห้องปฏิบัติการและสัตว์ทดลอง เป็นรากฐานที่ช่วยให้เข้าใจกลไกและศักยภาพก่อนการศึกษาในมนุษย์ต่อไป

ดูงานวิจัยทั้งหมดที่เกี่ยวข้อง

กรองห้องสมุดงานวิจัยด้วยชื่อเรื่อง ชื่อผู้เขียน หรือปีที่ตีพิมพ์ของงานวิจัยนี้